搖(yao)瓶(ping)在微生(sheng)物種子制(zhi)備工(gong)藝(yi)中的應(ying)用(yong)

標(biao)簽(qian)：搖瓶(ping) 緩(huan)沖液 微(wei)生(sheng)物 種子制(zhi)備

搖(yao)瓶(ping)種子即(ji)接種在搖瓶(ping)內(nei)用於搖瓶(ping)發(fa)酵(jiao)試(shi)驗(yan)或發(fa)酵(jiao)罐生(sheng)產的微生(sheng)物菌(jun)種。用(yong)於接種傳(chuan)代第壹(yi)代(dai)的種子稱(cheng)為“母瓶(ping)"，用(yong)於接種傳(chuan)代第二代(dai)的種子就叫做(zuo)“子瓶(ping)"。“母(mu)瓶(ping)"和“子瓶(ping)"均(jun)可應(ying)用(yong)在微生(sheng)物發(fa)酵(jiao)罐進(jin)行(xing)規模擴(kuo)培(pei)傳(chuan)代培養(yang)。



壹(yi)、培養基制(zhi)備
在搖瓶(ping)中進(jin)行(xing)種子制(zhi)備的主要(yao)目標(biao)是(shi)培(pei)養(yang)強(qiang)生(sheng)長(chang)活(huo)性(xing)的營養菌體(ti)，所以在配制(zhi)培養(yang)基階(jie)段必須以滿(man)足(zu)菌(jun)體生(sheng)長(chang)要(yao)求為目的。比如(ru)在培養(yang)基中添加(jia)足(zu)量(liang)的營養物質(zhi)，包括(kuo)碳、氮源、緩沖(chong)液、無(wu)機(ji)鹽和生(sheng)長(chang)因(yin)子等物質(zhi)。在培養(yang)基中添加(jia)緩(huan)沖液的主要(yao)作(zuo)用是(shi)調(tiao)節(jie)培養基中的PH值(zhi)，是(shi)培(pei)養(yang)基的PH環境長(chang)期(qi)處(chu)於穩定(ding)狀(zhuang)態(tai)。常用(yong)的PH調節劑主要(yao)有磷酸(suan)鹽緩(huan)沖(chong)液、PBS緩(huan)沖液等。培(pei)養基分裝(zhuang)完成，封(feng)口後需要(yao)置於高(gao)壓滅(mie)菌鍋(guo)中進(jin)行(xing)高(gao)壓滅(mie)菌。 滅(mie)菌完成後緩(huan)慢(man)降壓，防(fang)止因(yin)氣(qi)壓驟(zhou)降造(zao)成培(pei)養(yang)基沖擊(ji)瓶(ping)塞(sai)。

二、種子接(jie)種
在進(jin)行(xing)搖瓶(ping)種子接(jie)種時(shi)，普遍采用(yong)的是(shi)斜(xie)面法或米(mi)孢子粒(li)計(ji)數接(jie)入(ru)的方(fang)式。 如(ru)果采用(yong)米孢(bao)子粒(li)計(ji)數接(jie)入(ru)接(jie)種法(fa)進(jin)行(xing)接種的缺陷在於，接種量(liang)的壹致性很(hen)難掌握(wo)，這樣容(rong)易(yi)導致搖瓶(ping)種子的質量(liang)穩定(ding)性(xing)差(cha)。因此(ci)，對(dui)於接種量(liang)較(jiao)為敏感的菌種，壹(yi)般會采用(yong)懸(xuan)液接(jie)種法(fa)進(jin)行(xing)接種。懸(xuan)液接(jie)種法(fa)是(shi)用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水將(jiang)細(xi)胞(bao)或微(wei)生(sheng)物孢(bao)子洗(xi)脫(tuo)成為混(hun)合液，然後按固定體(ti)積數量(liang)接(jie)種在搖瓶(ping)種子培(pei)養(yang)基中的壹種接(jie)種方(fang)法(fa)。懸(xuan)液接(jie)種法(fa)增加了(le)接(jie)種數(shu)量(liang)的均壹、穩定(ding)性(xing)。 

三、振(zhen)蕩(dang)培養(yang) 
搖瓶(ping)種子采用(yong)的振蕩(dang)培養(yang)搖床主要(yao)有旋轉(zhuan)式振蕩(dang)和往復(fu)式振蕩(dang)兩種。正(zheng)常情(qing)況下(xia)生(sheng)產抗生(sheng)素類(lei)的企(qi)業(ye)使用較(jiao)多(duo)的是(shi)旋(xuan)轉(zhuan)式振蕩(dang)搖床(chuang)。旋轉式振蕩(dang)搖床(chuang)由於在主軸和從動(dong)軸(zhou)間(jian)會有25mm-50mm左(zuo)右(you)的偏心距產生(sheng)，所以在振蕩(dang)作(zuo)用時更(geng)有利於氣(qi)體(ti)交(jiao)換(huan)。部(bu)分特(te)殊的微生(sheng)物也(ye)會使用振(zhen)蕩(dang)培養(yang)箱進(jin)行(xing)培養(yang)。 

四、收(shou)獲保(bao)存(cun) 
搖瓶(ping)種子在培養(yang)完成後盡(jin)量(liang)立即(ji)使用。如(ru)果臨(lin)時用(yong)不(bu)到(dao)的可放(fang)在4℃冰(bing)箱中保(bao)存(cun)，但(dan)是(shi)保(bao)存(cun)期以不(bu)超(chao)過3天為宜(yi)。為避免影響生(sheng)產質(zhi)量(liang)，這類冷(leng)藏(zang)處(chu)理(li)的種子多(duo)數(shu)用於搖瓶(ping)發(fa)酵(jiao)試(shi)驗(yan)或小(xiao)型發(fa)酵(jiao)罐實(shi)驗(yan)，壹(yi)般不(bu)直(zhi)接做(zuo)生(sheng)產用(yong)種子。

五(wu)、影(ying)響搖瓶(ping)種子的質量(liang)
影(ying)響微生(sheng)物搖(yao)瓶(ping)種子質(zhi)量(liang)的因素主要(yao)有：菌體(ti)濃(nong)度、培養基成分、接(jie)種密(mi)度、設備(bei)轉速(su)等。 

   蘇(su)州阿(e)爾(er)法(fa)阿(e)爾(er)法(fa)生(sheng)物實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)有限公(gong)司十(shi)三年(nian)來(lai)壹(yi)直專註(zhu)於生(sheng)物科(ke)學領域(yu)的儀(yi)器(qi)設備(bei)及(ji)實(shi)驗(yan)耗(hao)材的供應(ying)，在蘇(su)南市(shi)場(chang)具(ju)有較高(gao)的影響力，主要(yao)供應(ying)細(xi)胞(bao)培(pei)養板、細(xi)胞培養瓶(ping)、搖(yao)瓶(ping)、離(li)心管、pcr管、移(yi)液槍(qiang)吸(xi)頭等千(qian)余種實(shi)驗(yan)室(shi)試(shi)劑耗(hao)材，同(tong)時與80余(yu)家生(sheng)產品(pin)牌(pai)廠(chang)商深度合(he)作(zuo)，所供(gong)應(ying)包括(kuo)搖床、生(sheng)物反應(ying)器(qi)、發(fa)酵(jiao)罐、移液器(qi)、PCR儀(yi)、低(di)溫(wen)冰(bing)箱等100多(duo)種實(shi)驗(yan)室(shi)儀(yi)器(qi)設備(bei)。