bca蛋白(bai)定(ding)量試(shi)劑盒(he)的使(shi)用(yong)方(fang)法(fa)

用(yong)BCA蛋白(bai)定(ding)量的方(fang)法(fa)進(jin)行蛋白(bai)定(ding)量， 是(shi)保羅(luo).史密斯團(tuan)隊(dui)在(zai)20 世(shi)紀(ji)年(nian)代開(kai)創的(de) 。目(mu)前已(yi)成為(wei)蛋白(bai)定(ding)量的主要(yao)實(shi)驗方(fang)法(fa)。BCA蛋白(bai)定(ding)量法是(shi)蛋白(bai)定(ding)量實驗中常用(yong)的測(ce)定(ding)方(fang)法(fa)之(zhi)壹(yi)，除(chu)此(ci)之(zhi)外，還有Bradford法(fa)和紫外分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)法(fa)。 常用(yong)的bca蛋白(bai)定(ding)量試(shi)劑盒(he)有碧雲(yun)天(tian)bca蛋白(bai)定(ding)量,bca蛋白(bai)定(ding)量試(shi)劑盒(he)等。BCA蛋白(bai)定(ding)量主要(yao)分(fen)為(wei)兩(liang)個(ge)步驟(zhou)：

壹(yi)是(shi)在(zai)堿(jian)性環境(jing)下(xia)將蛋白(bai)樣(yang)本(ben)中(zhong)的二(er)價(jia)銅離(li)子(zi)轉(zhuan)換為(wei)壹(yi)價(jia)銅，也就是(shi)將CU離(li)子(zi)作為(wei)顯(xian)色(se)劑，這樣(yang)的反應過(guo)程也被成為(wei)雙(shuang)縮(suo)脲 (NH2-CO-NH-CO-NH2) 反應。

下面(mian)進入實(shi)驗的第(di)②環節(jie)，樣(yang)本(ben)中(zhong)的蛋白(bai)在(zai)BCA 與(yu)銅離(li)子(zi)的(de)參與(yu)下(xia)進(jin)壹(yi)步完成反應，形(xing)成紫(zi)紅(hong)色(se)的絡(luo)合物(wu)。此(ci)時根據被還(hai)原(yuan)的二(er)價(jia)銅離(li)子(zi)數估算蛋白(bai)質(zhi)濃度的(de)函(han)數。用(yong)分光(guang)光度(du)計(ji)測(ce)試(shi)562 nm波段(duan) 的(de)吸(xi)光度(du)。通(tong)過(guo)蛋白(bai)濃度函(han)數、吸(xi)光度(du)等項(xiang)與(yu)BSA 蛋白(bai)標(biao)準品(pin)對比(bi)，從而推(tui)算出(chu)蛋白(bai)含(han)量即(ji)蛋白(bai)定(ding)量。

（上圖(tu)為(wei)： BCA蛋白(bai)定(ding)量實驗步驟(zhou)圖(tu)）

我們知道在(zai)BCA蛋白(bai)定(ding)量實驗中，蛋白(bai)質(zhi)的肽(tai)鏈(lian)結(jie)構會受主要(yao)影(ying)響(xiang)，還有壹(yi)些螯合劑與(yu)還(hai)原(yuan)劑也會影響(xiang)到(dao)實(shi)驗的反應過(guo)程，比如常見的EDTA,EGTA,DTT, 還有β- 硫(liu) 基乙醇等試(shi)劑。壹(yi)般(ban)要(yao)求(qiu)β- 硫(liu) 基乙醇的濃度不(bu)大(da)於 0.001% ； EDTA 濃度低(di)於 10mM ； 二(er)硫(liu)蘇糖醇 DTT 試(shi)劑的(de)話需要(yao)低(di)於 1mM. 試(shi)劑中(zhong)盡(jin)量(liang)不(bu)要(yao)使(shi)用(yong) EGTA 強(qiang)螯合劑。實(shi)踐(jian)證(zheng)明， BCA蛋白(bai)定(ding)量試(shi)劑盒(he) 中低(di)濃度的(de)鹽酸(suan)胍(gua)等變(bian)性劑(ji)和 NP-40 等去(qu)汙劑(ji)不(bu)會對BCA法(fa)的(de) 蛋白(bai)定(ding)量有太大(da)影響(xiang)， 實驗中可以初(chu)步忽(hu)略其(qi)幹擾力(li)。

    BCA蛋白(bai)定(ding)量法是(shi)蛋白(bai)定(ding)量實驗中常用(yong)的測(ce)定(ding)方(fang)法(fa)之(zhi)壹(yi)，除(chu)此(ci)之(zhi)外，還有Bradford 法(fa)和紫外分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)法(fa)。蘇州阿爾法生(sheng)物(wu) 13年(nian)的(de)生物(wu)儀(yi)器設備(bei)與(yu)耗材(cai)的行業經(jing)驗，主要(yao)供(gong)應的實(shi)驗室試(shi)劑包(bao)括幹細(xi)胞(bao)培養、凝(ning)膠成像(xiang)、 pcr 檢測、 ECL 發光、幹細(xi)胞(bao)培養、 bca蛋白(bai)定(ding)量試(shi)劑盒(he)等相(xiang)關(guan)系列產品(pin) 。