在生物反應器中進(jin)行(xing)HEK293細(xi)胞培養(yang)的(de)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)

     293細(xi)胞系(xi)作(zuo)為(wei)常(chang)用的(de)表(biao)達(da)外源(yuan)基(ji)因的(de)細(xi)胞株，由(you)於(yu)具(ju)有(you)容(rong)易(yi)轉(zhuan)染，生產速(su)度快(kuai)，瞬(shun)時表(biao)達(da)力(li)強(qiang)等優勢，生物制藥(yao)企(qi)業(ye)通(tong)常(chang)利用HEK293細(xi)胞株在微載體(ti)生物反應器中規(gui)模化生產抗(kang)體類(lei)藥物。

     生物制藥(yao)領域(yu)用(yong)HEK293細(xi)胞生產抗(kang)體藥(yao)物雖具(ju)有(you)較多優勢，但也(ye)存在缺陷，此(ci)類細(xi)胞無(wu)論(lun)是表(biao)達(da) E1A蛋(dan)白(bai)的HEK293A 系(xi)列(lie)還是(shi)慢(man)病毒HEK 293FT細(xi)胞都存在著細(xi)胞貼(tie)壁性(xing)弱，產出(chu)率(lv)低的(de)致(zhi)命缺陷。

這就(jiu)要求我們在培養(yang)HEK293細(xi)胞時嚴(yan)格遵(zun)相(xiang)關(guan)的操作(zuo)規(gui)程(cheng)。在生物反應器中培(pei)養(yang)HEK293細(xi)胞系(xi)，有(you)以(yi)下幾個方(fang)面需(xu)要註(zhu)意(yi)：

壹、選(xuan)擇合適的培養(yang)基(ji)和補料

培(pei)養(yang)基(ji)是進(jin)行(xing)細(xi)胞培養(yang)的(de)基(ji)礎營(ying)養(yang)物質(zhi)，HEK293原(yuan)代(dai)細(xi)胞主要來(lai)源(yuan)於(yu)人胚(pei)腎細(xi)胞其形態(tai)類似(si)於(yu)上皮(pi)細(xi)胞，所選(xuan)用的(de)培養(yang)基(ji)壹般為(wei)MEM等動物細(xi)胞培養(yang)基(ji)。OPM-CD Trans293培養(yang)基(ji)由(you)於(yu)不(bu)含生長因(yin)子和蛋白(bai)質(zhi)也(ye)是(shi)不錯(cuo)的(de)選(xuan)擇。OPM-293 ProFeed補料也(ye)有(you)提(ti)高轉(zhuan)染產物表(biao)達(da)效(xiao)果(guo)的作(zuo)用(yong)，可(ke)與(yu)OPM-CD Trans293培(pei)養(yang)基(ji)配合使(shi)用。合適的培養(yang)基(ji)、補料是(shi)保(bao)持393細(xi)胞良好生長的(de)必(bi)要條件。

二(er)、細(xi)胞轉(zhuan)染效率

細(xi)胞轉(zhuan)染後(hou)的陽(yang)性(xing)細(xi)胞比例(li)不(bu)僅決(jue)定(ding)著(zhe)細(xi)胞的轉(zhuan)染效率同時也(ye)決(jue)定(ding)著(zhe)抗(kang)體的(de)產能(neng)，所以(yi)提高(gao)轉(zhuan)染後(hou)的陽(yang)性(xing)細(xi)胞比例(li)是(shi)HEK293細(xi)胞細(xi)胞培養(yang)的(de)關鍵。細(xi)胞轉(zhuan)染前要保(bao)證傳(chuan)代(dai)細(xi)胞95%以上的存活率(lv)，傳(chuan)代(dai)頻率大概(gai)控制(zhi)在 3d/天，傳(chuan)代(dai)細(xi)胞密(mi)度壹般維持(chi)在3~4×10^6 cells/ mL左右轉(zhuan)染時可(ke)用新(xin)鮮的(de)培養(yang)基(ji)稀釋(shi)到合適的細(xi)胞密(mi)度有(you)利(li)於提升細(xi)胞轉(zhuan)染效率。

三(san)、細(xi)胞生長的(de)環(huan)境(jing)條件

細(xi)胞培養(yang)過(guo)程(cheng)中，細(xi)胞內(nei)毒素(su)會嚴重阻礙細(xi)胞生長，甚(shen)至(zhi)造成細(xi)胞雕亡，作(zuo)業(ye)過(guo)程(cheng)中設(she)法減少轉(zhuan)染載體(ti)溶(rong)液內(nei)毒素(su)殘(can)留(liu)是提高(gao)細(xi)胞存活率(lv)，加快(kuai)細(xi)胞生長速(su)度的重要手(shou)段(duan)之(zhi)壹。 另外，在細(xi)胞表(biao)達(da)時通(tong)過(guo)生物反應器溫度(du)控(kong)制系(xi)統(tong)調整(zheng)適(shi)宜(yi)的培(pei)養(yang)溫度(du)，也(ye)有(you)益(yi)於增加轉(zhuan)化產物，從(cong)而(er)提高(gao)細(xi)胞產物的總(zong)產量(liang)。

      蘇州(zhou)阿爾(er)法生物做為(wei)上海楚(chu)怡的簽(qian)約合作(zuo)商(shang)，可根(gen)據客戶要求的尺(chi)寸(cun)進(jin)行(xing)定制化操作(zuo)，可(ke)用(yong)於(yu)HEK293細(xi)胞培養(yang),懸(xuan)浮細(xi)胞培養(yang)、貼(tie)壁細(xi)胞培養(yang)、微(wei)載體(ti)培(pei)養(yang)、微(wei)生物培養(yang)的(de)生物反應器 ，實(shi)現了(le)廠商(shang)直供，壹(yi)罐(guan)多(duo)用(yong)，滿足不(bu)同的用(yong)戶需(xu)求。並提(ti)供免(mian)費的(de)安(an)裝(zhuang)服務(wu)、免(mian)費技術(shu)支(zhi)持(chi)、免(mian)費操作(zuo)指導等服務(wu)。如(ru)需(xu)了(le)解更(geng)多(duo)，請進(jin)入蘇州(zhou)阿爾(er)法生物咨詢(xun)。