瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)凝膠電(dian)泳(yong)實(shi)驗的實(shi)驗步(bu)驟及操(cao)作(zuo)方(fang)法(fa)

實(shi)驗前(qian)準(zhun)備：
1、瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)凝膠：瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)凝膠的配置(zhi)濃度需(xu)要根(gen)據DNA片(pian)段(duan)長(chang)度的大小(xiao)而(er)定。具(ju)體(ti)的瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)凝膠的配置(zhi)濃度參考範(fan)圍(wei)如(ru)下(xia)：

2、緩(huan)沖(chong)液：核(he)酸的電(dian)泳(yong)緩沖(chong)液主(zhu)要有(you)有(you) Tris-硼酸(TBE)、Tris-乙(yi)酸(TAE)和(he)Tris-磷酸(TPE) 3種(zhong)。實(shi)驗中(zhong)多(duo)選用TBE緩沖(chong)液，如(ru)果(guo)考(kao)慮(lv)成(cheng)本因素(su)的話也(ye)可以嘗(chang)試(shi)使用TAE緩沖(chong)液。TPE緩(huan)沖(chong)液磷酸鹽(yan)濃度較高(gao)，在進行(xing)DNA回收時容易(yi)形成(cheng)沈澱。10XTBE緩(huan)沖(chong)液可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)購買，也(ye)可以自行(xing)配制(zhi)。
10XTBE緩沖(chong)液配(pei)制(zhi)方(fang)法(fa)如下(xia)：
Tris:108克(ke)
EDTA: 9.3克(ke)
硼酸:55克(ke)
加(jia)純(chun)水到1000ul (PH為8.0～8.2之(zhi)間) ，使用時用20倍(bei)的水稀(xi)釋到(dao)0.5XTBE即可。

3、指示劑的使用
指示劑：在(zai)DNA電(dian)泳(yong)實(shi)驗中(zhong)常(chang)用的指示劑主(zhu)要為溴(xiu)二(er)甲苯酚(fen)藍(lan)和(he)二(er)甲苯青等。堿性環境下(xia)的溴二(er)甲苯酚(fen)藍(lan)呈現(xian)紫藍(lan)色(se)，在(zai)不同(tong)濃度的瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)凝膠中(zhong)的遷移(yi)速率(lv)也(ye)不相同(tong)。比如(ru)：在0.6%濃度的凝膠中(zhong)的遷移(yi)率(lv)與(yu)1KB長(chang)度的DNA片(pian)段(duan)基(ji)本壹致(zhi)。而在(zai)1%左(zuo)右濃度的瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)凝膠中(zhong)遷移(yi)速率(lv)與(yu)0.6KB長(chang)度的雙鏈(lian)DNA片(pian)段(duan)基(ji)本壹致(zhi)。
二甲苯青溶於(yu)水呈現(xian)藍色，同(tong)樣在(zai)濃度不同(tong)的凝膠中(zhong)二甲苯青的遷移(yi)速率(lv)也(ye)是不相同(tong)的，比如(ru)在1%瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)凝膠電(dian)泳(yong)時，其遷移(yi)速率(lv)大(da)致(zhi)與(yu)2Kb雙鏈(lian)DNA接(jie)近。

4、染色劑(ji)的使用
染色劑(ji)：核(he)酸電(dian)泳(yong)後(hou)，需(xu)經染色後(hou)才(cai)能顯(xian)現出(chu)帶(dai)型，瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)凝膠實(shi)驗較(jiao)為常(chang)用的是EB染色，也(ye)就是溴化乙(yi)錠染色法(fa)。根(gen)據實(shi)際(ji)實(shi)驗情況，可(ke)在(zai)凝膠電(dian)泳(yong)緩沖(chong)液中(zhong)加(jia)入濃度為0.5ug/ml的溴化乙(yi)錠，或電(dian)泳(yong)後(hou)將(jiang)凝膠置(zhi)入(ru)濃度為0.5ug/ml EB溶(rong)液(ye)中(zhong)染色10-15分(fen)鐘。即可看到(dao)條(tiao)帶(dai)。值的註意(yi)的是EB濃度如果(guo)過(guo)高(gao)會(hui)影(ying)響到(dao)條(tiao)帶(dai)的清晰(xi)度。

5、核(he)酸電(dian)泳(yong)設備：
核(he)酸電(dian)泳(yong)設備主要包(bao)括(kuo)電(dian)泳(yong)儀、電(dian)泳(yong)槽、梳(shu)子等。

6.核(he)酸電(dian)泳(yong)方(fang)法(fa)
（1）在用純(chun)水清洗(xi)過(guo)的電(dian)泳(yong)槽裏(li)放(fang)置(zhi)好(hao)梳(shu)子。
（2）將(jiang)稀(xi)釋好(hao)的0.5xTBE緩沖(chong)液加(jia)入三(san)角(jiao)瓶(ping)中(zhong)，並(bing)加(jia)入定(ding)量(liang)的瓊(qiong)脂(zhi)粉，根(gen)據實(shi)驗要求(qiu)配置(zhi)好(hao)對應(ying)的瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)凝膠。待(dai)冷卻到(dao)60°C時(shi)即可加(jia)入EB。緩(huan)慢倒入(ru)電(dian)泳(yong)槽中(zhong)凝固(gu)。
（3）待膠凝固(gu)後(hou)，箱(xiang)電(dian)泳(yong)槽中(zhong)緩緩(huan)加(jia)入0.5XBE濃度的TBE，加(jia)入量(liang)以(yi)淹(yan)沒(mei)膠面2MM為宜。
（4）打(da)開電(dian)源(yuan)，進行(xing)電(dian)泳(yong)操作(zuo)。
（5）根(gen)據電(dian)泳(yong)條(tiao)帶(dai)進行(xing)電(dian)泳(yong)分析比對(dui)。