技術(shu)文(wen)章(zhang)
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BCA蛋白定量法和Bradford蛋白定量法的(de)優缺(que)點對(dui)比(bi)
更(geng)新(xin)時(shi)間:2022-06-28
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BCA 蛋白定量 的實驗原理是在(zai)堿(jian)性條件(jian)下,H | NH2----C-COOH | R 將Cu²+還(hai)原為CU+與(yu) BCA 結(jie)晶(jing)為(wei)紫色(se)的(de)化(hua)合(he)物(wu),再(zai)通過測(ce)定 562 nm波(bo)長(chang)OD值來判定還(hai)原劑(ji)的(de)含(han)量。
下列(lie)表(biao)分別對(dui)兩(liang)種實驗方(fang)法做以(yi)對(dui)比(bi):

通(tong)過上表中(zhong)的的(de)對(dui)比(bi),我(wo)們(men)不難看(kan)出(chu)Bradford實驗法的(de)速度(du)比(bi)較(jiao)快(kuai),平(ping)常(chang)BCA 蛋白定量 的孵(fu)育(yu)時(shi)間大約(yue)30分鐘(zhong)甚至更(geng)長,而(er)采用Bradford蛋白定量法則(ze)需要(yao)幾分鐘(zhong)即(ji)可(ke)完(wan)成(cheng)實驗。
雖(sui)然(ran)其(qi)標(biao)準(zhun)曲線(xian)的線(xian)性擬合(he)程(cheng)度(du)不如(ru)BCA定量法,但(dan)它(ta)的二(er)項式(shi)契合(he)度(du)卻(que)較(jiao)高(gao)。
(下(xia)圖(tu)顯示(shi)為(wei):二(er)項式(shi)的標(biao)準曲線(xian)制作方法)

除(chu)此(ci)之外,Bradford 蛋白定量還(hai)有(you)壹(yi)個小(xiao)小(xiao)的(de)缺(que)陷(xian),那(na)就(jiu)是它(ta)比(bi)較(jiao)容(rong)易(yi)受(shou)高(gao)濃(nong)度(du)的(de)去垢劑(ji)影(ying)響(xiang),比(bi)如(ru)需要(yao)SDS的實驗濃(nong)度(du)低(di)於0.01%,TRITON X-100的實驗濃(nong)度(du)低(di)於0.005%等(deng)。
解決(jue)的(de)辦法是:使(shi)用(yong)與Bradford 兼容(rong)的(de)去垢劑(ji),從(cong)而(er)匹(pi)配(pei)到(dao)相應(ying)的實驗濃(nong)度(du)即(ji)可(ke)。
Bradford蛋白定量實驗雖(sui)然(ran)實驗在(zai)制作二(er)項式(shi)標線(xian)和公式(shi)計算較繁(fan)瑣,但(dan)如(ru)果能(neng)成(cheng)功破解以(yi)上三個問題,那麽Bradford法對(dui)比(bi)BCA法來說(shuo)還(hai)是有(you)不少優勢(shi)的(de),比(bi)如(ru)可(ke)以(yi)節(jie)省(sheng)很多(duo)時(shi)間等(deng)。對(dui)於追求實驗效率的實驗員(yuan)來說(shuo),熟練掌握(wo)Bradford實驗法是個不錯(cuo)的(de)選(xuan)擇(ze)。
蘇州(zhou)阿(e)爾法生(sheng)物(wu)13年(nian)的(de)生(sheng)物(wu)儀(yi)器設備與(yu)耗(hao)材(cai)的(de)行(xing)業(ye)經驗(yan),主要(yao)經營凝(ning)膠(jiao)成(cheng)像(xiang) , 微量(liang)天(tian)平(ping)、 Pcr 檢測(ce)儀(yi)、離(li)心(xin)機、混(hun)勻(yun)儀、振(zhen)蕩培(pei)養(yang)箱、二(er)氧(yang)化碳(tan)振蕩培(pei)養(yang)箱、 微孔(kong)板(ban)振(zhen)蕩(dang)器、二(er)氧(yang)化碳(tan)培(pei)養(yang)箱、微生(sheng)物(wu)發(fa)酵罐(guan)。還(hai)可(ke)以(yi)關註更(geng)多(duo)阿(e)爾法生(sheng)物(wu)其(qi)他(ta)產(chan)品(pin)如(ru):蛋白定量試(shi)劑(ji)、滲(shen)透(tou)壓(ya)儀、電(dian)子天(tian)平(ping)、搖(yao)床(chuang)、排槍(qiang)移(yi)液(ye)器、旋(xuan)渦混合(he)儀(yi)、切膠儀、純水機、電(dian)泳(yong)儀、溶劑(ji)過濾(lv)器(qi)、真(zhen)空泵、超低(di)溫冰箱、離(li)心(xin)管、實驗室(shi)試(shi)劑(ji)盒(he)、幹(gan)細胞培(pei)養(yang) 等(deng)系列(lie)產(chan)品(pin)。部(bu)分儀器可(ke)以(yi)免費(fei)試(shi)用(yong), 瑞寧移(yi)液(ye)器 類(lei)目可(ke)免費(fei)校(xiao)準(zhun),免費(fei)出(chu)具 CNAS 報(bao)告。生(sheng)物(wu)試(shi)劑(ji)包(bao)括:BCA蛋白定量試(shi)劑(ji)盒(he)、蛋白預制膠(jiao)、緩沖(chong)液(ye)等(deng)。
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