微生(sheng)物菌(jun)種保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)

標簽：微生(sheng)物 微膠(jiao)囊 

  微生(sheng)物應用技術(shu)在細(xi)胞(bao)工廠(chang)以(yi)及研究(jiu)各種生(sheng)物過(guo)程(cheng)實(shi)驗(yan)中起(qi)著(zhe)重要作(zuo)用，但(dan)是(shi)微生(sheng)物的保存以及微生(sheng)物培(pei)養(yang)的連(lian)續(xu)性壹(yi)直(zhi)是微生(sheng)物應用領(ling)域(yu)的難題。實(shi)踐(jian)證明，與(yu)在平(ping)板(ban)或(huo)發(fa)酵罐中連(lian)續(xu)傳代培(pei)養(yang)微生(sheng)物培(pei)養(yang)物相(xiang)比(bi)，建立(li)微生(sheng)物庫(ku)可(ke)以(yi)輕松(song)實(shi)現(xian)微生(sheng)物儲(chu)存和(he)檢(jian)索。

根(gen)據(ju)儲(chu)存時(shi)間(jian)的長短(duan)和微生(sheng)物的種類(lei)，壹(yi)般會(hui)采(cai)用不同的保存方法(fa)。長期(qi)保存(cun)的主(zhu)要原(yuan)理是(shi)保持微生(sheng)物長(chang)期(qi)處於休(xiu)眠狀(zhuang)態(tai)，免(mian)受(shou)汙染(ran)及遺(yi)傳變(bian)化，直(zhi)到(dao)使(shi)用時(shi)使(shi)其(qi)恢復(fu)生(sheng)機。這(zhe)種方(fang)法(fa)通常(chang)是(shi)通過(guo)使(shi)用低(di)溫和(he)冷(leng)凍或幹(gan)燥(zao)技術(shu)來減(jian)少(shao)細(xi)胞代謝活(huo)動(dong)來實(shi)現(xian)的。近年(nian)來，還(hai)有(you)壹(yi)種新(xin)型微生(sheng)物保(bao)存(cun)技術(shu)是微膠(jiao)囊化保存法，主(zhu)要用於(yu)保(bao)存益(yi)生(sheng)菌。

短(duan)期(qi)存儲(chu)（持續(xu)增(zeng)長(chang)）

微生(sheng)物的連(lian)續(xu)生(sheng)長可(ke)以(yi)在瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養(yang)基上(shang)維持很(hen)短(duan)的時間(jian)。微生(sheng)物的瓊脂平板(ban)培(pei)養(yang)物在實(shi)驗(yan)室(shi)冰(bing)箱(xiang) (4°C) 中可(ke)存(cun)活數(shu)周，而細菌培(pei)養(yang)物可(ke)在 4°C 下作(zuo)為瓊脂(zhi)刺(ci)培(pei)養(yang)物保(bao)存(cun)長達(da)壹(yi)年(nian)。大(da)多數(shu)微生(sheng)物（細(xi)菌(jun)、真菌(jun)和(he)藻(zao)類）都(dou)可(ke)以(yi)使(shi)用這(zhe)種方(fang)法(fa)儲(chu)存，推(tui)薦用於(yu)經(jing)常使(shi)用的培(pei)養(yang)物。使(shi)用培(pei)養(yang)基中的營(ying)養物質(zhi)，這(zhe)些(xie)培(pei)養(yang)物不斷生(sheng)長，盡管(guan)在較低(di)溫度下生(sheng)長速度較慢，使(shi)它(ta)們(men)能(neng)夠在可(ke)用營(ying)養物質(zhi)的作(zuo)用下存(cun)活(huo)更長時(shi)間(jian)。

為了盡量減少(shao)瓊(qiong)脂的汙染(ran)和幹(gan)燥(zao)，培(pei)養(yang)板(ban)應用實(shi)驗(yan)室(shi)薄(bo)膜牢固地包(bao)裹(guo)起(qi)來並倒(dao)置存(cun)放(fang)（瓊脂面朝上(shang)）。在瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養(yang)基上(shang)短(duan)期(qi)儲(chu)存的主(zhu)要優(you)勢是微生(sheng)物容(rong)易(yi)回收(shou)。使(shi)用時(shi)，只(zhi)需(xu)將它(ta)們(men)劃(hua)線(xian)到(dao)新鮮(xian)的培(pei)養(yang)板(ban)上(shang)或將(jiang)它(ta)們(men)接(jie)種到(dao)液體(ti)培(pei)養(yang)基中並在最(zui)佳(jia)生(sheng)長溫度下孵育！

然而(er)，隨著(zhe)時(shi)間(jian)的推(tui)移，瓊(qiong)脂(zhi)會(hui)變(bian)幹(gan)，培(pei)養(yang)基中的營(ying)養物質(zhi)會(hui)被微生(sheng)物耗(hao)盡。代(dai)謝(xie)廢(fei)物也(ye)會(hui)累(lei)積到(dao)有毒(du)水平。營(ying)養缺(que)乏(fa)和(he)有毒廢(fei)物的積累最(zui)終(zhong)會(hui)導(dao)致儲(chu)存的微生(sheng)物死(si)亡(wang)。

A. 使(shi)用直(zhi)線(xian)將(jiang)單個細菌(jun)菌落(luo)放(fang)入(ru)壹(yi)瓶軟瓊脂(zhi)中，然後孵育形(xing)成瓊脂(zhi)刺(ci)培(pei)養(yang)物。B.細(xi)菌(jun)在瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養(yang)基板上(shang)劃線(xian)並孵育。

長期(qi)儲(chu)存

對(dui)於(yu)長期(qi)儲(chu)存，微生(sheng)物在低(di)於(yu)冰(bing)點(dian)（-20°C、-80°C 或(huo)液(ye)氮(dan)）的溫度下冷(leng)凍保存(cun)或冷(leng)凍幹(gan)燥(zao)（凍幹(gan)）。冷(leng)凍保存(cun)適用於(yu)範(fan)圍(wei)廣泛(fan)的細菌、藻(zao)類、真菌(jun)、病(bing)毒和(he)原生(sheng)動物。超(chao)低(di)溫會(hui)大(da)大(da)降低(di)酶活(huo)性，從(cong)而降低(di)微生(sheng)物的代謝過程(cheng)。為防止(zhi)冰晶(jing)形(xing)成對(dui)細(xi)胞造成損害(hai)，在 -20°C、-80°C 或(huo)液(ye)氮(dan) (-196°C) 下儲(chu)存之(zhi)前，將細胞(bao)重新懸浮在含(han)有(you)冷(leng)凍保護(hu)劑（如(ru)甘(gan)油）的生(sheng)長培(pei)養(yang)基中。或者(zhe)，細(xi)胞(bao)也(ye)可(ke)以(yi)在冷(leng)凍前重新懸浮在脫(tuo)脂牛奶(nai)中 。為了最(zui)大(da)限(xian)度地提(ti)高回(hui)收(shou)率(lv)，建議在細(xi)胞(bao)濃(nong)度最高的生(sheng)長靜(jing)止(zhi)期(qi)冷凍培(pei)養(yang)物。大(da)多數(shu)培(pei)養(yang)物可(ke)以(yi)在 -20°C 的低溫小(xiao)瓶（圖 2）中儲(chu)存至(zhi)少(shao)壹(yi)年(nian)，壹(yi)些(xie)細(xi)菌(jun)原(yuan)液在 -80°C 和(he)液(ye)氮(dan)中儲(chu)存時(shi)仍(reng)可(ke)存(cun)活數(shu)十年(nian)！冷(leng)凍微生(sheng)物可(ke)以(yi)通過(guo)在 37°C 下解(jie)凍並接種到(dao)新鮮(xian)培(pei)養(yang)基中而復活(huo) 。

上(shang)圖（微生(sheng)物置(zhi)於(yu)凍存管(guan)中）

冷凍幹(gan)燥(zao)（凍幹(gan)）通過(guo)在真空(kong)中將水轉化為冰來去(qu)除冷(leng)凍樣品(pin)中的水分，從(cong)而(er)阻止(zhi)微生(sheng)物代(dai)謝(xie)過程(cheng)並將細(xi)胞(bao)轉化為幹(gan)燥(zao)的顆(ke)粒(li)，以(yi)便在安(an)瓿(bu)中儲(chu)存和(he)運(yun)輸（圖(tu) 3）。冷(leng)凍幹(gan)燥(zao)已被(bei)用於(yu)保(bao)存細(xi)菌、藻(zao)類、酵(jiao)母(mu)、病(bing)毒(du)和(he)孢子(zi)形(xing)成真菌(jun) 。然(ran)而，凍幹(gan)不適用於(yu)某(mou)些(xie)細(xi)菌(jun)和(he)非孢子(zi)真菌(jun)，因(yin)為它(ta)們(men)不能在冷(leng)凍幹(gan)燥(zao)的壓力(li)下存(cun)活(huo)。在接(jie)種到(dao)新鮮(xian)培(pei)養(yang)基中之(zhi)前，可(ke)以(yi)通過(guo)在生(sheng)長培(pei)養(yang)基（細菌(jun)和藻(zao)類）、含(han)有(you)細(xi)菌(jun)宿(xiu)主(zhu)（噬(shi)菌體(ti)）或(huo)水（真菌(jun)和(he)酵母(mu)）的生(sheng)長培(pei)養(yang)基中再水化細胞沈(chen)澱來回(hui)收(shou)凍幹(gan)培(pei)養(yang)物 

圖(tu)3 。 含(han)有凍幹(gan)微生(sheng)物的安瓿(bu)。

如(ru)何使(shi)用微膠(jiao)囊保(bao)存(cun)微生(sheng)物？

微囊化，是指細胞在儲(chu)存前(qian)被(bei)包(bao)裹(guo)在基質(zhi)中，屬於(yu)壹(yi)種長(chang)期(qi)的微生(sheng)物保(bao)存(cun)方法(fa)，此法(fa)避免(mian)了(le)微生(sheng)物長(chang)期(qi)直(zhi)接暴(bao)露於(yu)冷(leng)凍或幹(gan)燥(zao)的嚴(yan)酷環(huan)境(jing)中。由(you)於存在基質(zhi)保(bao)護細胞，增(zeng)加(jia)儲(chu)存期(qi)間(jian)的穩定性。當(dang)在-80°C 下儲(chu)存時(shi)，益(yi)生(sheng)菌在藻(zao)酸(suan)鈣中的微膠(jiao)囊化已被證明可(ke)以(yi)提高它(ta)們(men)的生(sheng)存力(li)。益生(sheng)菌被(bei)包(bao)裹(guo)在納(na)米(mi)纖(xian)維和(he)液(ye)滴(di)當(dang)中可(ke)以(yi)保持較強(qiang)活力(li)。 

蘇(su)州阿爾(er)法(fa)實(shi)驗(yan)器(qi)材有限(xian)公(gong)司(si)13年(nian)來專(zhuan)註於生(sheng)物實(shi)驗(yan)室(shi)儀(yi)器(qi)設備(bei)與(yu)試劑耗材行業(ye)，微生(sheng)物相(xiang)關的主(zhu)要產(chan)品(pin)有微生(sheng)物發(fa)酵罐、液(ye)氮罐(guan)、細菌培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)基等(deng)多品(pin)種、全(quan)規(gui)格現(xian)貨(huo)供應，更多商(shang)品詳情(qing)進入(ru)網(wang)站查(zha)看(kan)。