Vero細胞(bao)培(pei)養接(jie)種工(gong)藝技(ji)術

Vero細胞(bao)近年來(lai)作(zuo)為新時代制(zhi)藥產業(ye)的(de)熱(re)門(men)細胞(bao)，成(cheng)為轉(zhuan)基因(yin)、蛋白、抗(kang)體(ti)類(lei)制(zhi)藥企業(ye)普(pu)遍(bian)使用(yong)使(shi)用(yong)的(de)載體(ti)工(gong)具(ju)。使(shi)用(yong)細胞(bao)生(sheng)物(wu)反(fan)應(ying)器進行(xing)Vero細胞(bao)的(de)規模化(hua)增(zeng)殖(zhi)的(de)接(jie)種工(gong)藝如下(xia)：

壹(yi)、實(shi)驗前(qian)準備(bei)：
細胞(bao)∶Vero 細胞(bao)（ATCC級別(bie)的(de) ）、DMEM培(pei)養基(ji)(Hyclone)、新生(sheng)牛(niu)血清(qing)、抗(kang)生(sheng)素(su)、除菌濾(lv)膜(mo)、CT-3微載體(ti)、2L實(shi)驗室生(sheng)物(wu)反(fan)應(ying)器，5L搏旅/楚怡(yi)細胞(bao)培(pei)養生(sheng)物(wu)反(fan)應(ying)器、搖(yao)瓶(ping)、細胞(bao)培(pei)養瓶(ping)、水浴(yu)鍋(guo)。

二、接(jie)種實(shi)驗方法
1.微載體(ti)的(de)預處理(li)和(he)滅(mie)菌： 接(jie)種實(shi)驗前(qian)的(de)微載體(ti)需(xu)要用(yong)無(wu)鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的(de)PBS磷(lin)酸(suan)鹽(yan)緩沖液進行(xing)吸脹、洗(xi)滌(di)，之(zhi)後(hou)進行(xing)高(gao)壓滅菌處理(li)，工(gong)藝控(kong)制(zhi)參數為：吸脹質量(liang)濃度不超(chao)過50 g·L-1，滅(mie)菌溫度121 ℃，20 min。

2.轉(zhuan)瓶(ping)接種操作(zuo)：
將(jiang)培(pei)養瓶(ping)內的(de) Vero 細胞(bao)接種於(yu)500ML的(de)轉(zhuan)瓶(ping)內，CT-3 微載體(ti)濃度為 3g/L，並(bing)加(jia)入適量(liang)的(de)混(hun)合(he)牛(niu)血(xue)清(qing)的(de)DMEM培(pei)養基(ji)，此時接種密(mi)度以2.0×10°cells/mL為(wei)宜(yi)。
在微載體(ti)細胞(bao)生(sheng)長(chang)過程中，可適當(dang)補(bu)加(jia)微載體(ti) 2g/L，使(shi)微載體(ti)濃度達到(dao) 5g/L即可接種在5L細胞(bao)培(pei)養生(sheng)物(wu)反(fan)應(ying)器中作(zuo)為種子(zi)細胞(bao)進行(xing)培(pei)養。

3.規模擴(kuo)培(pei)接種操作(zuo)
當細胞(bao)生(sheng)長(chang)到(dao)達壹(yi)定密(mi)度時，將(jiang)細胞(bao)及新的(de)微載體(ti)壹(yi)起(qi)轉(zhuan)入大(da)容積(ji)的(de)微載體(ti)培(pei)養養反(fan)應(ying)器中，進行(xing)細胞(bao)培(pei)養。此過程的(de)工(gong)藝參數為：溫控(kong)： 37士(shi)0.1℃，溶解氧為(wei) 50%空(kong)氣飽和(he)度，攪(jiao)拌(ban)器的(de)轉(zhuan)速維(wei)持(chi)在20～32 r/min即可。當細胞(bao)密(mi)度達 1.1×10'cells/mL時，即可進入(ru)下(xia)遊環(huan)節進行(xing)產(chan)品(pin)生(sheng)產(chan)。

介於國外(wai)生(sheng)物(wu)反(fan)應(ying)器成(cheng)本高(gao)昂(ang)，售後(hou)服(fu)務(wu)不便(bian)，型號固定、貨期長(chang)等(deng)因(yin)素，我國(guo)自主(zhu)研(yan)發設備(bei)生(sheng)產(chan)的(de)生(sheng)物(wu)反(fan)應(ying)器目(mu)前(qian)已廣泛應(ying)用(yong)於(yu)制(zhi)藥生(sheng)產(chan)、新藥開發(fa)、蛋白研發(fa)、轉(zhuan)基因(yin)產品(pin)等環(huan)節，壹(yi)些國(guo)內生(sheng)物(wu)反(fan)應(ying)器專業生(sheng)產(chan)商甚至(zhi)可根(gen)據(ju)客(ke)戶要求的(de)尺(chi)寸(cun)進行(xing)定制(zhi)化(hua)操作(zuo),比(bi)如搏旅除生(sheng)產(chan)固定型號規格外(wai)，還可以根(gen)據(ju)客(ke)戶要求定制(zhi)不同(tong)級別(bie)、規格的(de)生(sheng)物(wu)反(fan)應(ying)器、發酵(jiao)罐(guan)主(zhu)要用(yong)於(yu)微生(sheng)物(wu)培(pei)養、種子(zi)制(zhi)備、浮(fu)細胞(bao)培(pei)養、貼(tie)壁(bi)細胞(bao)培(pei)養、微載體(ti)培(pei)養等(deng)，實(shi)現(xian)了(le)廠商(shang)直(zhi)供，壹(yi)罐(guan)多(duo)用(yong)，滿(man)足(zu)不(bu)同(tong)的(de)用(yong)戶(hu)需(xu)求(qiu)。